实验室干货,AT 590 Succinimidyl Ester 精准使用指南

我们来详细梳理一下 "AT 590 succinimidyl ester (AT 590 SE)" 的标准使用方法。
AT 590 SE 是一种常用的 "荧光团",属于 "琥珀酰亚胺基酯 (Succinimidyl Ester, SE)" 类,可以与含有 "赖氨酸 (Lysine, Lys)" 残基的 "胺类化合物"(包括蛋白质、多肽、抗体、核酸等)进行 "共价连接",从而标记这些分子。
以下是其在实验室中的标准使用流程和注意事项:
"核心原理:" 利用琥珀酰亚胺基酯基团 (-CO-NH-CO-OR) 上的活泼羰基,与目标分子(如蛋白质)上的赖氨酸残基的 ε-氨基 (-NH₂) 发生 "酰胺键" 缩合反应,形成共价键。
"一、 标记前准备 (Preparation)"
1. "确认目标分子:" "必须确认" 目标分子(如抗体、蛋白、多肽)上含有足够的 "赖氨酸 (Lysine)" 残基。这是反应发生的先决条件。可以通过氨基酸测序、蛋白质谱或文献查询来确认。 如果目标分子是抗体,通常抗体链(尤其是轻链的铰链区,以及重链的可变区和恒定区)上都有多个赖氨酸

相关阅读延伸:实验室干货:AT 590 Succinimidyl Ester的标准使用方法

标题:AT 590 Succinimidyl Ester,ATTO 590 NHS ester

一、化学试剂的基本信息

保存条件:避光、-20°C储存,避免反复冻融

溶解性:溶于无水DMSO、DMF等有机溶剂,部分溶于水

英文名称:AT 590 Succinimidyl Ester

中文名称:ATTO 590 NHS 活性酯

CAS:670269-33-7

分子式:C41H42ClN3O11

分子量:788

Ex/Em:593/622 nm

规格标准:该试剂的纯度通常达到95%以上,规格包括1g、5g、10g等,也可按需包装。

生产商信息:陕西新研博美生物科技有限公司

二、基本定义

ATTO 590 Succinimidyl Ester是一种基于罗丹明结构的橙色-红色荧光染料,其活性基团为N-羟基琥珀酰亚胺酯。

该化合物通过共价键标记含伯胺的生物分子,形成稳定的酰胺键。

核心特性

高荧光量子产率:提供明亮的荧光信号,适用于低丰度靶标检测。

良好的光稳定性与热稳定性:耐受激光照射和高温环境,适用于长时程成像。

水溶性适中:可在生理pH范围内保持稳定,兼容生物缓冲体系。

三、标准使用方法

(一)标记反应条件

缓冲体系:

pH 8.0–9.0(碳酸盐或硼酸盐缓冲液),避免含胺缓冲剂(如Tris)。

蛋白质浓度:2–10 mg/mL(过低浓度降低标记效率)。

反应参数:

染料:蛋白质摩尔比:3:1(可优化至1.2–2:1)。

温度与时间:室温(25°C)反应1–4小时;抗体标记建议4°C过夜。

操作步骤:

溶解染料:无水DMSO配制10 mM母液(现配现用)。

混合反应:缓慢加入染料溶液至蛋白质/核酸溶液中,避光振荡。

终止反应:加入甘氨酸或 Tris 缓冲液淬灭未反应染料。

(二)标记后纯化

去除游离染料:凝胶过滤层析。

核酸标记纯化:乙醇沉淀或HPLC分离。

(三)替代方案

水溶性需求:可选用iFluor® 568 NHS ester。

Alexa Fluor® 594替代:光谱特性接近,稳定性优。

四、安全操作指南

个人防护:佩戴合适的防护眼镜、手套等。

存储条件:温度、湿度要求,远离火源、氧化剂等。

五、新研博美目录列表:

BMTA NHS Ester

BFOL NHS Ester

5'-azido NHS Ester

CF 405L NHS Ester

Ferrocene NHS Ester

Biotin 蛋白标记试剂盒

Cyanine3 NHS ester

Cyanine5.5 maleimide

Sulfo-Cyanine3 amine

CF568 conijugated-rCTB

Pacific Orange NHS Ester

Pomalidomide-C6-NHS ester

6-Carboxyfluorescein,6-FAM

Enhanced NaTrium Green-2 AM

5-FITC-PEG3-azide,Fluorescein-PEG3-N3

5-FITC-PEG3-Amine,Fluorescein-PEG3-NH2

温馨提示:

试剂仅用于科研实验,不可用于人体~~~~~编辑作者:陕西新研博美生物科技有限公司木南

发布于 2025-08-19 02:13
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